La enfermedad celíaca es una intolerancia permanente a la gliadina, que se asocia con una lesión de la mucosa del intestino delgado proximal: desaparición de las vellosidades con aplanamiento de la superficie, alargamiento aparente de las criptas hasta el lumen intestinal y daño intenso de los enterocitos; se acompaña de malabsorción y de alteraciones inmunológicas con activación de alteraciones inmunológicas dependientes de los linfocitos B y T.

Se han detectado en la circulación anticuerpos contra la gliadina, la reticulina y antiendomisio (EmA), es decir dirigidos contra la proteína que gatilla el cuadro y contra proteínas del tejido conectivo. En los enterocitos, los EmA tendrían como antígeno a un enzima intracelular, la transglutaminasa tisular (tTG) que desamida la gliadina y se uniría a ella formando un neoantígeno que podría ser el target de los anticuerpos que dañan el epitelio. Sin embargo, hay numerosos aspectos de la patogenia de esta enfermedad que no están aclarados: 1) no se sabe cual es el mecanismo responsable de la lesión de la mucosa intestinal en la enfermedad celíaca; 2) la normalización de la arquitectura de la mucosa con el régimen sin gluten indica algunas de sus células guardan una "memoria" de la arquitectura normal; dichas células, al ser dañadas directa o indirectamente por la gliadina en los susceptibles, causan o ayudan a causar la lesión intestinal. En un proyecto financiado por Fondecyt demostramos que en la enfermedad celíaca hay alteraciones de la membrana basal; esto sugiere que los miofibroblastos (MF), las células que participan en la síntesis de la membrana basal y en sus alteraciones funcionales, estarían afectados. Los MF están situados inmediatamente debajo de los enterocitos, separados de ellos por la membrana basal. Habría más de un tipo de MF: uno de ellos sería capaz de inducir proliferación celular y crecimiento de estructuras semejantes a las criptas mientras que otro induciría la diferenciación celular y el desarrollo de vellosidades. Esto sugiere que los MF juegan un papel importante en la morfogénesis de la mucosa, en la diferenciación de la unidad cripta-vellosidad; se ha demostrado que intervienen en el control de la proliferación de las células troncales (stem) y en su diferenciación en enterocitos, células caliciformes, neuroenteroendocrinas y de Paneth. Los MF sintetizan las proteínas de la membrana basal y componentes de la matriz extracelular así como metaloproteinasas que la degradan. A través de la síntesis de interleuquinas, quemoquinas, factores de crecimiento y mediadores de inflamación, los MF modulan funciones de los enterocitos, como la secreción de agua y electrolitos. La presencia en la membrana plasmática de los MF de receptores para muchas de estas moléculas sugiere que estas células reaccionan frente a estímulos que se originan a distancia.

Los MF no han sido estudiados en la enfermedad celíaca: nuestra hipótesis es que juegan un papel clave en la patogenia del daño intestinal inducido por el gluten en este cuadro. Proponemos que los MF de estos enfermos tienen características funcionales distintas de las de los sujetos sanos, ya sea constitutivamente o cuando están en presencia de gliadina. Por lo tanto, el objetivo general de este proyecto es estudiar las alteraciones de estas células en la enfermedad celíaca, en la que serían diferentes de los sujetos sanos.

Como objetivos específicos, en enfermos celíacos y en controles planeamos 1) estudiar estas células aplicando técnicas morfológicas en biopsias de mucosa duodeno-yeyunal cuando los sujetos ingieren gluten y después de suprimirlo de la dieta y en cultivos de dichas células obtenidas de cultivos de biopsias de mucosa duodeno-yeyunal de los mismos pacientes y sus controles; 2) caracterizar la expresión de las citokinas GM-CSF, TNF-(, IL-1, IL-6 e IL-10 y de los factores de crecimiento TGF-ß, bFGF, KGF, y HGF en MF incubados con gliadina; 3) investigar la producción de moléculas de matriz (colágeno IV, laminina, fibronectina por los MF; 4) evaluar en cultivos en gel de colágeno el efecto de los MF sobre el desarrollo de células epiteliales aplicando criterios morfológicos y funcionales; 5) evaluar la actividad de las metaloproteinasas 1; 2 y 3 en MF; 6) estudiar la proliferación y la apoptosis de células de origen tumoral colónico T84 cultivadas en medio condicionado por MF estimulados con gliadina y en controles. La producción de moléculas en los medios de cultivo será cuantificada por medio reacción de polimerasa en cadena reversa (RT-PCR) para cuantificar el RNAm correspondiente empleando partidores (primers) adecuados. La proliferación celular será cuantificada mediante la incorporación de 5BrDU y la activación de los mecanismos de apoptosis mediante la medición de la actividad de caspasas. Esperamos que este proyecto permita llegar a una mejor comprensión acerca del papel que ejercen los MF en la génesis de las lesiones y entender las alteraciones funcionales de la mucosa en la enfermedad celíaca